Kurz & Knapp, Maxam-Gilbert-Sequenzierung

Juli 27th, 2007 Autor: Phillip Kroll -
  1. Ausgangsmaterial ist aufgereinigte, doppelsträngige DNA auf vier Proben aufgeteilt
  2. Jeder DNA Strang wird am 5' Ende mit einem radioaktivem Phosphat (32P) markiert
  3. Aufschmelzen der doppelsträngigen DNA in Einzelstränge durch Detergenzien und Erhitzen (90°C)
  4. Verschiedene Chemikalien für spezifische Spaltreaktionen werden in jede der vier Proben gegeben
  5. Stränge werden an spezifischen Basen gespalten
  6. Jede Probe wird separat gelelektrophoretisch aufgetrennt
  7. Übertragung auf ein Autoradiogramm
  8. Ablesen der Banden in Laufrichtung ergibt die Sequenz

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